在6孔板中用Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑高效率轉(zhuǎn)染RAW 264.7細(xì)胞方法總結(jié)。
實(shí)驗(yàn)方案如下：
一、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備
1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素），
二、操作流程
1、先將細(xì)胞接種到6孔板細(xì)胞培養(yǎng)板，細(xì)胞匯合度在70%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
2、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent 貨號(hào)AD600150轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。
3、將復(fù)合物加入*培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面，后期會(huì)進(jìn)一步摸索此條件）。
4、轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液。
5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率
下圖是用Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞的熒光和明場(chǎng)圖片
三、美國Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息：
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 報(bào)價(jià) |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600025 | 0.25ML | 1 | 1590 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600050 | 0.5 | 1 | 2390 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600075 | 0.75 | 1 | 2890 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600150 | 1.5ML | 1 | 4490 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600500 | 5ML | 1 | 電詢 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD601000 | 10ML | 1 | 電詢 |
四、RAW 264.7細(xì)胞簡(jiǎn)述：
RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞. 此細(xì)胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。
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