RAW264.7細胞轉(zhuǎn)染效率低怎樣提高轉(zhuǎn)染效率一直是困擾實驗者的一道難題，特別對于比較大的質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染更是困難；我們實驗室用美國Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號AD600150轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞整理了一套優(yōu)化方案希望對大家轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞提高轉(zhuǎn)染效率有一定的幫助。
下圖是用美國Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號AD600150在6孔板轉(zhuǎn)染8000bp左右的pEGFP-C1r到RAW264.7細胞的熒光和細胞明場圖片。
提高轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞條件如下
一、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備
1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素
二、操作流程
1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板，細胞匯合度在70%左右，再進行轉(zhuǎn)染。
2、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life公司Advanced DNA RNA貨號AD600150轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。
3、將復(fù)合物加入*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面，我后期會進一步摸索此條件）。
4、轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液。
5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率
三、注意事項：
1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等；
2細胞培養(yǎng)Zeta Life z7181-500胎牛血清，Gibco的DMEM;
四、美國Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息：
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 報價 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600025 | 0.25ML | 1 | 1590 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600050 | 0.5 | 1 | 2390 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600075 | 0.75 | 1 | 2890 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600150 | 1.5ML | 1 | 4490 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD600500 | 5ML | 1 | 電詢 |
Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑 | AD601000 | 10ML | 1 | 電詢 |
上海市楊浦區(qū)國康路100號2層
一鍵分享網(wǎng)站到：
