產(chǎn)品名稱： Balance CD 293無血清培養(yǎng)基現(xiàn)貨*

產(chǎn)品品牌：CELL-WISE

產(chǎn)品規(guī)格：1L

產(chǎn)品貨號(hào)：CW001

產(chǎn)品描述：

Balance CD 293 培養(yǎng)基適用于懸浮培養(yǎng)條件下的HEK293細(xì)胞（如293-F,293-T, Expi-293F等）的高密度生長和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)。 Balance CD 293 培養(yǎng)基含有細(xì)胞生長所需的全部營養(yǎng)成份，無需添加任何添加物即可使用。（注意：此培養(yǎng)基不包含抗生素以及血清）

產(chǎn)品特點(diǎn):

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基，適用于HEK293細(xì)胞高密度懸浮培養(yǎng)

無蛋白、無動(dòng)物源、化學(xué)成分限定

即用型*培養(yǎng)基,無需添加額外成分

Balance CD 293無血清培養(yǎng)基現(xiàn)貨*基礎(chǔ)參數(shù)：

產(chǎn)品使用方法：

細(xì)胞馴化

1）直接馴化

大部分情況下，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細(xì)胞，可以直接適應(yīng)Balance CD 293 medium，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養(yǎng)基即可。

2）漸進(jìn)式馴化

注意：選用低代次、處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行馴化

①在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細(xì)胞生長穩(wěn)定，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到2x10 6 cells/ml后進(jìn)行傳代，傳代細(xì)胞密度控制在0.5-0.6×10 ⁶ cells/mL，5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為75:25；

②將細(xì)胞置于37℃，5% CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；

③當(dāng)細(xì)胞密度3-4天后達(dá)到3x10 ⁶ cells/ml且細(xì)胞活率>90%，傳代時(shí)5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為50:50，細(xì)胞密度控制在0.5×10 ⁶ cells/mL。如細(xì)胞生長慢，可離心上清，留20%條件培養(yǎng)基，加入80%的5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基比例為75:25的混合培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)；

④重復(fù)步驟③逐步增加Balance CD 293培養(yǎng)基所占的比例(5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基的比例為25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293培養(yǎng)基；

⑤經(jīng)過在100%的 Balance CD 293 培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng)，傳代后3-4天細(xì)胞的密度可以達(dá)到2-3×10 ⁶  cells/mL，細(xì)胞活率大于90%，這說明細(xì)胞已經(jīng)*適應(yīng)了Balance CD 293 培養(yǎng)基。之后進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞的起始密度可以降到0.3×10 ⁶ cells/mL，一般傳代2-3次后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

注意: 一般細(xì)胞馴化過程中，前三代細(xì)胞的狀態(tài)可能不是很好，但一般從第四代狀態(tài)會(huì)有改善。

細(xì)胞傳代

1）取細(xì)胞培養(yǎng)樣品，人工或儀器測定細(xì)胞密度以及活率；

2）計(jì)算傳代所需的細(xì)胞用量，建議起始細(xì)胞密度為0.2-0.4×10 ⁶ cells/mL。建議復(fù)蘇的細(xì)胞至少培養(yǎng)兩代后再用于其他用途。傳代培養(yǎng)體積建議為15-20 mL（100 mL的培養(yǎng)瓶）或50-60 mL（250 mL 的培養(yǎng)瓶）；

3）將細(xì)胞置于37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)，3-4天傳代一次。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染在Balance CD 293培養(yǎng)基中，采用商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑（例如 Gibco 293Fectin™ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit ）或 PEI 可以實(shí)現(xiàn)對 HEK293 細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞復(fù)蘇

1）迅速取出凍存的細(xì)胞，在37℃水浴條件下進(jìn)行解凍（可以在水中輕輕晃動(dòng)，時(shí)間控制在60s以內(nèi)）；

2）輕輕地混勻細(xì)胞并將融化的細(xì)胞全部移至15ml無菌離心管中，逐滴加入10ml預(yù)熱到37℃的培養(yǎng)基，離心換液（100g，5min）去除全部上清，加入新鮮培養(yǎng)基重懸，使得細(xì)胞密度達(dá)到0.4-0.6⁶cells/ml；

3）將細(xì)胞置于37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為110-175rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；

4）2-4天后通過人工或儀器測定細(xì)胞的密度及活率，如果細(xì)胞密度達(dá)到1.0*10⁶cells/ml，活率達(dá)到85%以上則可進(jìn)行傳代培養(yǎng)；

5）如果細(xì)胞密度低于1.0*106cells/ml，則建議對細(xì)胞進(jìn)行離心（100g，5min），然后重懸于20-30ml的新鮮培養(yǎng)基中使得細(xì)胞密度為0.4-0.6*106cells/ml左右，并繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞正常生長則可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

1）凍存細(xì)胞時(shí)，要選擇處于對數(shù)生長期同期細(xì)胞活率在90%以上的HEK293cells；

2）事先計(jì)算好凍存的細(xì)胞管數(shù)和所用的培養(yǎng)基的體積；

3）制備細(xì)胞凍存液：46.25%的新鮮Balance CD 293培養(yǎng)基+46.25%條件Banance CD 293培養(yǎng)基，混合之后再加入7.5%DMSO，存放在4℃，一般為當(dāng)天用當(dāng)天制備；

4）對細(xì)胞樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)；

5）取樣計(jì)數(shù)，以100g，3-5min的條件離心收集細(xì)胞，然后用凍存培養(yǎng)基（4℃）重懸細(xì)胞，使得細(xì)胞密度為5-10*10⁶cells/ml；

6）取樣計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度；迅速分裝細(xì)胞到無菌的凍存管中，一般2ml的凍存管1-1.5ml，貼好標(biāo)簽，密封；

7）將細(xì)胞凍存管放到程序降溫凍存盒（注意填充異丙醇，4℃預(yù)冷）中，置于-80℃冰箱（每分鐘下降1℃），過夜存放后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中進(jìn)行保存。