為了轉染raw 264.7小鼠巨噬單核細胞我們實驗室嘗試了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它轉染試劑，對于我們8000bp的質(zhì)粒DNA基本轉染后都沒有熒光信號；師兄在中山大學的同學給我們推薦了他們實驗室用Zeta Life Advanced DNA RNA貨號AD600050轉染raw 264.7細胞經(jīng)驗分享。
按照中山大學師兄給出的方法并結合我實驗室情況我把自己在6孔板轉染raw 264.7細胞的相關經(jīng)驗整理如下，希望對你轉染raw 264.7細胞有一定的幫助，下面是我*用轉染raw 264.7細胞的熒光和細胞明場圖片，后期進一步優(yōu)化后的新圖片我也會隨后呈上：
一、質(zhì)粒DNA準備
1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素
二、操作流程
1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板，細胞匯合度在70%左右，再進行轉染。
2、復合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號AD600050轉染試劑按照1:1（12ug:12ul）關系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。
3、將復合物加入*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面，我后期會進一步摸索此條件）。
4、轉染24小時后對細胞進行正常換液。
5、質(zhì)粒DNA轉染48小時后熒光檢測轉染效率
三、Zeta Life Advanced DNA RNA轉染試劑信息：
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 報價 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600025 | 0.25ML | 1 | 1590 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600050 | 0.5 | 1 | 2390 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600075 | 0.75 | 1 | 2890 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600150 | 1.5ML | 1 | 4490 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD600500 | 5ML | 1 | 電詢 |
Advanced DNA RNA 轉染試劑 | AD601000 | 10ML | 1 | 電詢 |
四、注意事項：
1本轉染方法不適用在下面轉染試劑的轉染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等轉染試劑；
2細胞培養(yǎng)基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;
上海市楊浦區(qū)國康路100號2層
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