服務(wù)簡介
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究兩種蛋白質(zhì)相互作用的有效方法。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合，也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔，已成為研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。
當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。
這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實(shí)際情況，得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
免疫共沉淀服務(wù)價(jià)格與周期
服務(wù)項(xiàng)目 | 內(nèi)容 | 價(jià)格 | 服務(wù)周期 |
免疫共沉淀 | 我們進(jìn)行CO-IP和Western Blot檢測 | 詢價(jià) | 3-4周 |
免疫共沉淀服務(wù)步驟
（1）轉(zhuǎn)染后24-48 h 可收獲細(xì)胞，加入適量細(xì)胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min, 細(xì)胞裂解液于4°C， 大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清；
（2）取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；
（3）取10μl protein A 瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3 次，每次3,000 rpm離心3 min；
（4）將預(yù)處理過的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h，使抗體與protein A瓊脂糖珠耦聯(lián)；
（5）免疫沉淀反應(yīng)后，在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次；后加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；
（6）SDS-PAGE, Western blotting或質(zhì)譜儀分析。
客戶提供
客戶提供蛋白樣品和沉淀用抗體；
新鮮的樣本材料（組織、細(xì)胞或蛋白溶液）；
用于western blot的一抗。
生物服務(wù)承諾
免疫共沉淀電子圖片及分析結(jié)果；
相互作用蛋白鑒定結(jié)果，質(zhì)譜鑒定結(jié)果和（或）western blot鑒定結(jié)果。
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