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MTT法檢測某種藥物對神經(jīng)干細胞的增殖實驗報告
更新時間:2019-12-09   點擊次數(shù):2867次

一、 實驗儀器與試劑

表格一:實驗儀器

儀器

廠家

型號

細胞培養(yǎng)箱

Thermo Scientific

HERA cell CO2

酶標儀  

Thermo Scientific

Multiskan Spectrum

 

表格二:試劑

試劑

廠家

DMEM/F12 培養(yǎng)基

Gibco

MTT

Sigma

胰酶

索來寶

DMSO

Sigma

 

二、 實驗步驟

收集生長狀態(tài)良好的神經(jīng)干細胞,消化并調(diào)整細胞懸液濃度,分于 96 孔板,

每孔 100μL,5000 個細胞/孔。

細胞置于 37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜后,小心棄去培養(yǎng)基。

根據(jù)藥物在細胞溶液中的終濃度使用細胞培養(yǎng)液配制相應(yīng)的藥物儲備液,隨后加入至相應(yīng)培養(yǎng)液中形成不同濃度的工作液(藥物在工作液中的體積比為 5%)。每孔細胞分別加入 100μL 相應(yīng)的工作液,每種濃度均設(shè) 3 個復孔。同時設(shè)置正常培養(yǎng)孔(只加入*培養(yǎng)液培養(yǎng)的細胞)和空白孔(沒有細胞,只加入相同量的*培養(yǎng)液)。

37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 后小心吸去上清,加入 80μL 新鮮培養(yǎng)液

和 20μL MTT 溶液(5 mg/mL),并繼續(xù)培養(yǎng) 4h。

吸掉上清,每孔加入 150μL DMSO,置搖床上低速振蕩 10 min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶標儀 490 nm 處測量各孔的 OD 值。

計算細胞生長抑制率%

實驗組OD值-空白組OD值

=1- ´100% 對照組OD值-空白組OD值

 

三、 實驗結(jié)果

 

藥物濃度

1mM

2mM

3mM

4mM

5mM

OD 值

0.648678

0.651091

0.714305

0.777446

0.797002

0.672702

0.712622

0.760024

0.783670

0.780728

0.678589

0.733039

0.778568

0.806155

0.772555

0.653876

0.699670

0.739670

0.778650

0.776490

0.628845

0.687968

0.777404

0.758746

0.799384

均值

0.656538

0.696878

0.753994

0.780933

0.785232

細胞生長抑制率 %

Mean±SD

23.87±1.99

18.76±3.06

11.51±2.72

8.10±1.70

7.55±1.22 

 

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